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細(xì)胞培養(yǎng)基

點(diǎn)擊次數(shù):2872     更新時(shí)間:2016-11-28

    經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種,其中 DMEM、 RPMI 1640、 MEM 、 DMEM/F12 都是應(yīng)用廣泛的培養(yǎng)基。其他 如 M199 、 IMDM 、 L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)。其具體的特征及應(yīng)用如下:

1、BME細(xì)胞培養(yǎng)基

    基礎(chǔ)Eagle培養(yǎng)基(Basal Medium Eagle),1955年Eagle設(shè)計(jì),BSS+12種氨基酸+谷氨酰胺+8種維生素。簡(jiǎn)單、便于添加,適于各種傳代細(xì)胞系和特殊研究用,在此基礎(chǔ)上改良的細(xì)胞培養(yǎng)基品種有MEM、DMEM、IMDM等。

2、MEM細(xì)胞培養(yǎng)基

    又稱*Eagle培養(yǎng)基(Minimal Essential Medium),1959年在Eagle's基礎(chǔ)培養(yǎng)基(BME)上修改而來(lái),刪去賴氨酸、生物素,氨基酸濃度增加,適合多種細(xì)胞單層生長(zhǎng),有可高壓滅菌品種,是一種基本、試用范圍廣的培養(yǎng)基,但因其營(yíng)養(yǎng)成分所限,針對(duì)生物試劑之特定細(xì)胞培養(yǎng)與表達(dá)時(shí),并不一定是使用效果佳或者經(jīng)濟(jì)的培養(yǎng)基。

3、DMEM

   DMEM是由Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基,起初是為小鼠成纖維細(xì)胞設(shè)計(jì)的。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍,維生素濃度是MEM的4倍,采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。開(kāi)始的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L,后來(lái)為了某些細(xì)胞的生長(zhǎng)需要,將葡萄糖含量又調(diào)整為4500 mg/L,這就是大家常說(shuō)的低糖和高糖了。

4、IMDM

    Guilber 和Iscove將Dulbecco' Medium 改良為 Iscove's Medium,用于培養(yǎng)紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞前體。此種培養(yǎng)液含有硒、額外的氨基酸和維生素、丙酮酸鈉和HEPES。并用硝酸鉀取代了硝酸鐵。IMDM還能夠促進(jìn)小鼠B淋巴細(xì)胞,LPS刺激的B細(xì)胞,骨髓造血細(xì)胞,T細(xì)胞和淋巴瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。IMDM為營(yíng)養(yǎng)非常豐富的培養(yǎng)液,因此可以用于高密度細(xì)胞的快速增殖培養(yǎng)。

5、RPMI-1640

   Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制,針對(duì)淋巴細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì),含BSS+21種氨基酸+維生素11種等?,F(xiàn)也用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),如哺乳動(dòng)物、特殊造血細(xì)胞、正?;驉盒栽錾陌准?xì)胞,雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng),其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞以及HCT-15上皮細(xì)胞等均可參考使用。

6、HamF10

   1963年Ham設(shè)計(jì),含微量元素,可在血清含量低時(shí)用,適用于克隆化培養(yǎng)。F10適用于倉(cāng)鼠、人二倍體細(xì)胞,特適于羊水細(xì)胞培養(yǎng)。

7、DMEM/F12

   Ham's F12是為在低血清濃度下克隆CHO細(xì)胞而設(shè)計(jì)的,現(xiàn)在也廣泛應(yīng)用于克隆形成率的分析及原代培養(yǎng)。F12還可以與DMEM等體積混合使用,得到一種高濃度與成分多樣化相結(jié)合的產(chǎn)物,這種培養(yǎng)基已應(yīng)用于許多原代培養(yǎng)及更難養(yǎng)的細(xì)胞系的培養(yǎng)。由于營(yíng)養(yǎng)成分豐富,且可以使用較少血清,故也常作為無(wú)血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

至于選擇何種培養(yǎng)基并沒(méi)有一定的標(biāo)準(zhǔn),有幾點(diǎn)建議可供參考:

(1)建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞的培養(yǎng)基??梢圆殚唴⒖嘉墨I(xiàn),或在購(gòu)買(mǎi)細(xì)胞株時(shí)咨詢。也可以在一些生物公司的上搜索,如Invitrogen上有一個(gè)Cell Line Database的工具,選擇你感興趣的細(xì)胞類型,它就會(huì)彈出的培養(yǎng)基、血清和轉(zhuǎn)染試劑等,有時(shí)還有優(yōu)化好的轉(zhuǎn)染步驟,很方便。

(2) 其它實(shí)驗(yàn)室慣用的培養(yǎng)基不妨一試,許多培養(yǎng)基可以適合多種細(xì)胞。

(3) 根據(jù)細(xì)胞株的特點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)的需要來(lái)選擇培養(yǎng)基。如小鼠細(xì)胞株多選RPMI1640 。

(4) 用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)目的細(xì)胞,觀察其生長(zhǎng)狀態(tài),可以用生長(zhǎng)曲線、集落形成率等指標(biāo)判斷,根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇佳培養(yǎng)基,這是客觀的方法,但比較繁瑣。

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