多肽的溶解方法

首先建議您用少量肽來試驗(yàn)的溶解方法，當(dāng)多肽溶解后，才能加緩沖液（注意：應(yīng)將多肽加入到適當(dāng)溶劑中攪拌）
一、凍干多肽的溶解

1、多肽溶解的主要問題是二級結(jié)構(gòu)的形成。雖然疏水肽鏈二級結(jié)構(gòu)的形成更明顯，但除最短的肽鏈外，此現(xiàn)象產(chǎn)生在幾乎所有肽鏈,與極性無關(guān)。所以，溶解多肽的第一個原則是使用無菌蒸餾水或去離子水，當(dāng)然無氧水最好。多肽溶液可能遇到細(xì)菌降解，為防止此情況的發(fā)生，應(yīng)溶解在無菌的蒸餾水中或用0.45或0.2孔徑的濾膜過濾除菌。含有Cys、Met、Trp的多肽很容易氧化，應(yīng)溶于無氧的水中，無氧水可通過注入惰性氣體（氮、氦、氬）減壓除氣得到；

2、若多肽不溶于純水，超聲處理有助于打碎顆粒并增加溶解度。注意:超聲處理會引起溶液發(fā)熱或多肽降解；

3、若多肽含有多個堿性氨基酸，使用（1-10%）的乙酸水溶液：對于疏水性強(qiáng)的多肽，應(yīng)使用50%的乙酸；

4、若多肽中含有大量酸性氨基酸，可用氨溶液（1-10%）或乙酸乙基馬非或重碳酸鹽等揮發(fā)性的堿性緩沖液溶解。pH值在層析前必須調(diào)整；

5、異丙醇和乙腈能溶解中等大小的多肽。若肽要上柱，有機(jī)溶劑的量必須很少否則將嚴(yán)重影響停留時間；

6、若多肽因含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳香鏈而高度疏水、或?yàn)橹行噪臅r，DMF或DMSO等膜變性劑的使用，有利于多肽的溶解：

a.高濃度模變性劑通過破壞多肽的二級結(jié)構(gòu)而助溶；

b.膜變性劑適于多肽分析液的制備，但可能會對其生物活性的研究工作造成干擾；

c.DMF是最佳變性劑（最高濃度可達(dá)30%），滴加至多肽溶解；

d.反相層析法時，DMF將與洗脫液前鋒一起流出，根據(jù)入量的多少，峰值可能很高。大多數(shù)肽能在大量DMF流出后幾分鐘內(nèi)流出，若肽鏈很小，洗脫太早，多肽的量將很低。

二、凍干多肽的保存

標(biāo)有“凍干保存"說明的多肽應(yīng)該保存在冰凍條件下，以-20℃以下最佳，其活性可保持多年。當(dāng)使用干凍產(chǎn)品時，開蓋前其容器應(yīng)在裝有新鮮干燥箱內(nèi)升至室溫。-20℃的產(chǎn)品，此過程需要一小時或更長，隨保裝而定。否則，當(dāng)容器打開，水氣進(jìn)入導(dǎo)致凝縮而降低穩(wěn)定性。一旦打開，應(yīng)迅速稱量完畢，立即封閉以免潮解，親水肽更應(yīng)注意。

三、溶解多肽的保存

多肽溶液比干粉的穩(wěn)定性差很多，為了獲得較好的效果，遵循以下原則：

1、分成小包裝避免反復(fù)凍融。使用多少解凍多少；

2、溶于pH5-7無菌的緩沖液中，-20℃儲存；

3、由于細(xì)菌能降解多肽，儲存前應(yīng)過濾細(xì)菌；

4、包含Cys、Met、Try、Glu、Asp的多肽易于氧化，因此應(yīng)保存在無氧化劑的環(huán)境中。

多肽的溶解方法