信帆生物：水性膠層析改良抗球蛋白試驗(yàn)方法
更新時(shí)間：2016-04-20 點(diǎn)擊次數(shù)：1447次在常規(guī)的抗體篩檢、鑒定以及交叉配血中，要求對(duì)具有輸血史、妊娠史及輸過(guò)血的受血者和供血者都應(yīng)做不*抗體檢測(cè);此外對(duì)新生兒溶血病、自身免疫性溶血病、藥物免疫溶血性疾病等診斷中，也都要求常規(guī)檢測(cè)不*抗體。
抗人球蛋白試驗(yàn)[anti-human globulin(AHG) test or Coombstest，Coombs T]zui初只用于檢測(cè)血清中不*抗體，經(jīng)過(guò)發(fā)展后，試管法的Coombs T始用于檢測(cè)患者體內(nèi)已經(jīng)結(jié)合了抗體和/或補(bǔ)體的紅細(xì)胞。但由于抗人球蛋白與血清中致敏紅細(xì)胞的抗體及血清中游離的免疫球蛋白都能結(jié)合，因此在試管法Coombs T時(shí)首先要洗滌去除未與紅細(xì)胞結(jié)合的游離免疫球蛋白，再加入抗人球蛋白，以避免抗人球蛋白被反應(yīng)液中非特異性免疫球蛋白中和而出現(xiàn)的假陰性反應(yīng)。由此導(dǎo)致其操作繁瑣、費(fèi)時(shí)，且一些弱反應(yīng)抗體不能檢出等缺點(diǎn)，難以滿足血型相容性試驗(yàn)的時(shí)間性要求。
上世紀(jì)90年代出現(xiàn)的微柱凝膠抗人球蛋白試驗(yàn)(microtube gel Coombs test，MG-Coombs T)，因?yàn)槿サ袅讼礈斐绦颍懦蔀榱顺Ｒ?guī)檢測(cè)血型不*抗體的方法;但MG-Coombs T尚存在血液標(biāo)本中纖維蛋白原易造成假陽(yáng)性、試劑原材料Sephadex價(jià)格高等缺點(diǎn)或問(wèn)題，此外凝膠卡中的原材料凝膠顆粒多為進(jìn)口，受少數(shù)公司壟斷，近年來(lái)價(jià)格越來(lái)越高，間接導(dǎo)致檢測(cè)成本的提高。這就是為什么MG-Coombs T在未能進(jìn)一步廣泛推廣的原因。
針對(duì)這一難題，中國(guó)科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所李勇研究員所帶領(lǐng)的血液免疫學(xué)與免疫遺傳學(xué)課題組建立了水性膠層析改良抗球蛋白試驗(yàn)(HCI-Coombs T)方法，通過(guò)將含紅細(xì)胞和血清的反應(yīng)液置于水性膠介質(zhì)試管中，低速離心使紅細(xì)胞穿過(guò)水性膠到達(dá)試管底部，而血清中非特異性球蛋白等滯留在水性膠之上，棄去反應(yīng)液和水性膠介質(zhì)后加入抗人球蛋白試劑，離心后觀察血凝結(jié)果(如圖)。
采用 HCI-Coombs T 的優(yōu)勢(shì)在于，通過(guò)低速離心后，紅細(xì)胞沉降到試管底部，而游離蛋白仍留在水性膠上層，棄去水性膠后即可達(dá)到將兩者分離的目的，從而代替經(jīng)典Coombs T中多次洗滌過(guò)程，省卻了傳統(tǒng)試管法孵育后需多次洗滌紅細(xì)胞的繁瑣程序，減少了傳統(tǒng)試管法試驗(yàn)可能因?yàn)橄礈旒t細(xì)胞不干凈而產(chǎn)生的假陰性問(wèn)題，同時(shí)避免了微柱凝膠法中纖維蛋白原以及陳舊標(biāo)本容易出現(xiàn)的假陽(yáng)性，具有操作簡(jiǎn)單快速、準(zhǔn)確性高、特異性好、原材料價(jià)格便宜等優(yōu)點(diǎn);而且水性膠介質(zhì)的性質(zhì)受到溫度變化影響較小，同時(shí)適用于大量標(biāo)本的高通量檢測(cè)，此外水性膠介質(zhì)用途廣泛，可用于免疫標(biāo)記技術(shù)(如elisa、免疫熒光、流式細(xì)胞法等)中其他顆粒性抗原抗體復(fù)合物的分離。
相關(guān)結(jié)果已發(fā)表在2014年《中國(guó)輸血雜志》第三期上，并被選為封面文章。從各個(gè)選擇的試驗(yàn)機(jī)構(gòu)反饋的信息來(lái)看，該診斷試劑檢測(cè)方法具有簡(jiǎn)單快速、成本低廉、應(yīng)用廣泛等優(yōu)點(diǎn)，并得到了使用者的認(rèn)可，目前該研究成果正在進(jìn)行醫(yī)療器械一類產(chǎn)品的注冊(cè)。
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