信帆生物：免疫瓊脂雙向擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)
更新時(shí)間：2016-05-07 點(diǎn)擊次數(shù)：914次可溶性抗原與相應(yīng)抗體持異性結(jié)合，兩者比例適當(dāng)并有電解質(zhì)存在及一定的溫度條件下，經(jīng)一定的時(shí)間，可形成肉眼可見的沉淀物，稱為沉淀反應(yīng) (precipitation ) 。沉淀反應(yīng)的抗原可以是多糖、蛋白質(zhì)、類脂等。與相應(yīng)的抗體相比，抗原分子小 ( ＜ 20pm) ，單位體積中所含抗原量多，具有的反應(yīng)面積。為了使抗原抗體之間比例適合，不使抗原過剩，故一般均應(yīng)稀釋抗原，并以抗原zui高稀釋度仍能與抗體出現(xiàn)沉淀反應(yīng)為該抗體的沉淀反應(yīng)效價(jià) ( 滴度 ) 。
瓊脂擴(kuò)散（ agar diffusion ）為可溶性抗原與抗體在瓊脂凝膠中所呈現(xiàn)的一種沉淀反應(yīng)。當(dāng)對應(yīng)的抗原、抗體在半固體瓊脂終相遇，且二者比例適當(dāng)時(shí)，便出現(xiàn)可見的白色沉淀線，這組沉淀線是一組抗原、抗體的特異性復(fù)合物。當(dāng)瓊脂中有多組不同的抗原、抗體存在時(shí)，便各自依其擴(kuò)散速度的差異，再適當(dāng)?shù)牟课恍纬瑟?dú)立的沉淀線。因此，瓊脂擴(kuò)散不僅用于疾病的診斷，更廣泛地用于抗原成分的分析。
免疫瓊脂雙向擴(kuò)散是將可溶性抗原和抗體分別加到瓊脂板上相應(yīng)的小孔中，兩者各自向四周擴(kuò)散，如抗原與抗體相對應(yīng)，兩者相遇即發(fā)生待異性結(jié)合，并在比例適合處形成白色沉淀線 ( 圖 5-1) 。如果所加抗原和抗體標(biāo)本中分別含有若干與血清學(xué)反應(yīng)無關(guān)的抗原抗體，則因各種抗原的擴(kuò)散系數(shù)和各對抗原抗體間的zui適比例不同，以及抗原抗體復(fù)合物所形成的沉淀線具有選擇性滲透屏障作用，擴(kuò)散后可以形成若干條沉淀線， — 條沉淀線代表一對抗原抗體。因此，通過雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)，用已知抗體 ( 或抗原 ) 檢測未知抗原 ( 或抗體 ) ，可鑒定抗原性物質(zhì)或免疫血清的濃度、純度及比較抗原之間的異同點(diǎn)。
圖 5-1 雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)示意圖
左圖為模式圖，右圖為實(shí)際試驗(yàn)的結(jié)果。上，兩個(gè)抗原孔里含有相同的抗原，沉淀線是不分叉的；中，兩個(gè)抗原孔里的抗原*不同，沉淀線分叉；下，兩個(gè)抗原孔里的抗原部分相同，沉淀線部分交叉。
