信帆生物：把細(xì)胞計數(shù)交給默克 把實驗時間留給文獻(xiàn)
更新時間：2016-05-21 點擊次數(shù)：1464次血球計數(shù)板的發(fā)明已經(jīng)有超過100年的歷史了，*，這種傳統(tǒng)的細(xì)胞計數(shù)方法雖然廉價，但卻很費(fèi)時費(fèi)力。其實，除了這點以外，使用血球計數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)還有許多可變的因素，使計數(shù)結(jié)果波動，可能會大大影響我們的實驗。
首先，由于使用的是顯微鏡肉眼觀測計數(shù)，人為的因素多，使計數(shù)結(jié)果不準(zhǔn)確，誤差大。尤其是經(jīng)過了一整天繁重的實驗后進(jìn)行計數(shù)，或需要同時對上樣的多種樣品進(jìn)行計數(shù)時，容易使人頭昏眼花，結(jié)果的準(zhǔn)確性更難保證。
第二，重復(fù)性差導(dǎo)致實驗結(jié)果可信度低。大家進(jìn)行細(xì)胞實驗時，經(jīng)常需要進(jìn)行3次以上的平行實驗，以驗證實驗結(jié)果的可重復(fù)性和可信度。有時候是同一個操作者分別在幾天重復(fù)同一實驗，有時候是不同操作者重復(fù)同一實驗。同一操作者細(xì)胞計數(shù)的重復(fù)性不會太好，不同操作者細(xì)胞計數(shù)的重復(fù)性就更差了，這會導(dǎo)致上樣量的波動，使得平行實驗的結(jié)果CV值增高，可信度降低，在發(fā)文章的時候達(dá)不到評委的要求，實驗結(jié)果有被挑戰(zhàn)，要求重做或補(bǔ)做實驗，或被退回的可能。
第三，需要合適的稀釋倍數(shù)。稀釋不夠，細(xì)胞太濃，不僅數(shù)的時間很長，還會導(dǎo)致數(shù)得眼花，數(shù)著數(shù)著就忘記哪些已經(jīng)被數(shù)過，容易數(shù)錯。稀釋過度，細(xì)胞太稀，會使細(xì)胞分布不均勻，計數(shù)的結(jié)果代表性下降，誤差增大。一般來說，使得稀釋后的細(xì)胞在1x105-1x106/mL濃度范圍內(nèi)，使標(biāo)準(zhǔn)計算5個方格共會數(shù)到50~500個細(xì)胞。這個濃度范圍很窄，這就要求我們在稀釋細(xì)胞前能較好地估計原始樣品的濃度，但很多時候都是很困難的。
第四，由于血球計數(shù)板使用的是抽樣計數(shù)的原理，抽樣計數(shù)時幾個細(xì)胞數(shù)目的誤差，會導(dǎo)致原始樣品的細(xì)胞數(shù)目的變化被極快地放大。若原始樣品的細(xì)胞濃度為2x106/mL，稀釋5倍后，血球計數(shù)板5個標(biāo)準(zhǔn)方格共會數(shù)到200個細(xì)胞，若每個方格不小心少數(shù)了3、4個細(xì)胞，則計算出來的zui終濃度為1.82x106/mL，會導(dǎo)致原始樣品的濃度產(chǎn)生180,000個/mL的差異。（同樣是原始濃度為2x106/mL的細(xì)胞樣品做5倍的稀釋，Scepter 計數(shù)的是50µL稀釋樣品中的全部細(xì)胞的數(shù)目（即2x104個細(xì)胞），因此能更準(zhǔn)確、更地計數(shù)。）
還有，對于壓線的細(xì)胞的計數(shù)與否需要遵循前后一致的原則（一般只計數(shù)大方格的上方和右方線上的細(xì)胞），這需要計數(shù)時提高熟練程度，才能提高重復(fù)性。
血球計數(shù)板升級替代方案
可能不少老師和同學(xué)都不知道，血球計數(shù)板是由法國科學(xué)家Louis-Charles Malassez于19世紀(jì)研發(fā)，用于血細(xì)胞計數(shù)，因此而得名。這項古老而又傳統(tǒng)的技術(shù)一直沿用至今，但并未隨著科研進(jìn)步而發(fā)展，還給越來越多的研究者帶來很多困擾。
升級是硬道理
古語：“工欲善其事，必先利其器”。小米加能獲得抗戰(zhàn)勝利，但恐怕難以贏得現(xiàn)代戰(zhàn)爭。細(xì)胞研究應(yīng)是同理，如今技術(shù)革新已推進(jìn)到了流式細(xì)胞術(shù)，然而國內(nèi)多數(shù)實驗室尚不能負(fù)擔(dān)的起巨大的投入，或許小型細(xì)胞計數(shù)/分析設(shè)備是多數(shù)實驗者的。
市場上常見的自動細(xì)胞計數(shù)器，其主要可分為兩類：基于圖像的細(xì)胞計數(shù)器(Automated vision-based counter)和基于庫爾特電阻抗原理的細(xì)胞計數(shù)器（Scepter為代表），兩者原理及操作方法大相徑庭。以下報告將從性、可靠性、便捷性等方面進(jìn)行比較，希望能對廣大細(xì)胞學(xué)研究者有所助益。
【準(zhǔn)確性比較】
圖1. 不同細(xì)胞濃度下各種細(xì)胞計數(shù)器的計數(shù)結(jié)果與實際數(shù)值的對比
上圖可見：血細(xì)胞計數(shù)板在高細(xì)胞密度時，計數(shù)結(jié)果與實際細(xì)胞密度有偏差，而基于圖像的細(xì)胞計數(shù)器則在多個濃度下均有偏差。這表明基于庫爾特原理的細(xì)胞計數(shù)方法在計數(shù)準(zhǔn)確性上優(yōu)于其他兩種細(xì)胞技術(shù)方法。（樣品為常見的COS7細(xì)胞）
【可靠性比較】
圖2. 不同細(xì)胞濃度下細(xì)胞計數(shù)的可重復(fù)性比較
上圖可見：Scepter的可重復(fù)性均明顯好于血細(xì)胞計數(shù)板和基于圖像的細(xì)胞計數(shù)器。（樣品為19種細(xì)胞系）
elisa試劑盒，人血清，放射免疫試劑盒，PCR代測，WB代測，放射免疫代測，進(jìn)口ELISA試劑盒，酶聯(lián)免疫代測，酶聯(lián)免疫試劑盒，染色液-信帆生物
上圖可見：傳統(tǒng)的血細(xì)胞計數(shù)板的計數(shù)時間遠(yuǎn)長于其他兩種計數(shù)。庫爾特原理計數(shù)法與基于圖像的細(xì)胞計數(shù)法相比，計數(shù)速度更為穩(wěn)定，而且計數(shù)時間約為后者的一半。Scepter計數(shù)時間zui短，平均時間僅為14秒。（樣品為常見的SF9，MCF7，HEK293細(xì)胞）
數(shù)據(jù)來源：血細(xì)胞計數(shù)板，您還在使用么？
Scepter的人性化設(shè)計使得使用者能夠輕易上手，只需要五步：儀器校驗、加載芯片、檢測樣品、卸下芯片、數(shù)據(jù)分析，操作方法和移液器相同，而且便于超凈臺內(nèi)操作。
選擇Scepter™手持式細(xì)胞計數(shù)器
以上可見，在滿足多數(shù)研究者基本細(xì)胞計數(shù)的要求上，手持式細(xì)胞計數(shù)器Scepter表現(xiàn)zui為優(yōu)異。此外，Scepter強(qiáng)大的數(shù)據(jù)分析能力也是其另一大特色。Scepter能夠提供細(xì)胞直方圖作為細(xì)胞計數(shù)依據(jù)，并且支持離線分析直方圖。通過直方圖可以獲知細(xì)胞直徑分布、細(xì)胞狀態(tài)、各細(xì)胞組分等數(shù)據(jù)。一次操作，更多的信息量，細(xì)胞研究水平因此而更上一層樓。因此，Scepter可以說是血球計數(shù)板的升級替代選擇。
索取Scepter產(chǎn)品資料
關(guān)于升級產(chǎn)品Scepter2.0：
榮獲諸多獎項的Scepter在2011年升級到了2.0版，新上市的Scepter2.0保留了前代產(chǎn)品直方圖結(jié)果顯示、類似移液器的操作、14秒疾速計數(shù)等諸多特色，新增如下亮點：擴(kuò)大了可檢測的細(xì)胞粒徑（3-36μm），增強(qiáng)了計數(shù)性（在小顆粒物或小直徑細(xì)胞上檢測的性增強(qiáng)，CV<5%），同時升級了聯(lián)機(jī)軟件的功能，提供更加全面的數(shù)據(jù)分析，使之成為目前市場上小型細(xì)胞計數(shù)設(shè)備的選擇！同時，前代產(chǎn)品仍可以通過聯(lián)機(jī)升級固件，輕松獲得Scepter 2.0的所有功能，而不影響當(dāng)前的使用效果！更多詳情請垂詢默克生命科學(xué)部-2分機(jī)。
活細(xì)胞、凋亡細(xì)胞計數(shù)請選擇Muse™ 新一代智能細(xì)胞計數(shù)儀
Muse™ 智能細(xì)胞計數(shù)儀內(nèi)置Pad版觸屏式電腦，的激光檢測原理，結(jié)合預(yù)置的細(xì)胞計數(shù)及活性檢測常規(guī)實驗方案，為您開創(chuàng)的計數(shù)新體驗。您只需動動手指，即可在短短的幾秒中之內(nèi)實現(xiàn)細(xì)胞活力分析及細(xì)胞計數(shù)；除此之外，Muse™ 智能細(xì)胞計數(shù)儀還可區(qū)分細(xì)胞早期凋亡及死細(xì)胞，并針對不同凋亡通路等進(jìn)行分析，在實現(xiàn)基本細(xì)胞計數(shù)功能基礎(chǔ)上，進(jìn)一步掌控細(xì)胞狀態(tài)，分分鐘讓您體驗悅動指尖的細(xì)胞分析藝術(shù)。
