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免疫熒光-標(biāo)本如何保存

點擊次數(shù):11719     更新時間:2016-08-09

免疫熒光-標(biāo)本如何保存,信帆生物為您答疑解惑!

一:標(biāo)本的處理

 

. 涂片和印片   血液、細(xì)菌培養(yǎng)物、腦脊液、體腔滲出液和細(xì)胞懸液等均可簡單地涂抹在玻片上,干燥固定后就可用于熒光抗體染色。腦脊液、臟器(肝、脾、淋巴結(jié)等)、細(xì)菌菌落或尸體病變組織可把切面壓印于玻片上作成印片,經(jīng)固定后再染色。

 

. 組織切片   這是組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)zui常用的顯微鏡標(biāo)本片。主要有以下兩種:①冷凍切片:為了使抗原zui大量的保存,的制片方法是冷凍切片,其優(yōu)點是操作簡單,組織的抗原性保存好,自發(fā)熒光較少,特異熒光強,同時適用于不穩(wěn)定的抗原,缺點是組織結(jié)構(gòu)欠清晰。②石蠟切片:石蠟切片是研究形態(tài)學(xué)的主要制片方法,它不但是觀察組織結(jié)構(gòu)的理想方法,而且可進(jìn)行回顧性研究。其優(yōu)點是組織細(xì)胞的精細(xì)結(jié)構(gòu)顯現(xiàn)清楚,但對抗原的保存量不如冷凍切片,并有組織自發(fā)熒光和非特異性熒光,需加酶消化處理。

 

. 細(xì)胞培養(yǎng)標(biāo)本   用HEP-2細(xì)胞或Hela細(xì)胞培養(yǎng),待細(xì)胞在玻片上形成單層,固定后用作抗核抗體等檢測的抗原片。還可使細(xì)胞單層生長在玻片上,再用病毒或病人標(biāo)本感染,然后固定,用熒光抗體染色法檢測病毒。

 

. 活細(xì)胞染色    檢查淋巴細(xì)胞表面抗原以及免疫球蛋白受體、癌細(xì)胞表面抗原、血清中抗癌細(xì)胞抗體等,均可用活細(xì)胞熒光抗體染色法。當(dāng)同時觀察細(xì)胞表面兩種抗原的分布和相互關(guān)系時,可用雙標(biāo)記法進(jìn)行染色。

 

二:標(biāo)本的固定

 

標(biāo)本固定的作用不僅使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固,終止細(xì)胞內(nèi)酶反應(yīng)過程,防止細(xì)胞自溶,以保持細(xì)胞固有形態(tài)和結(jié)構(gòu),更重要的作用是保存組織細(xì)胞的抗原性,防止標(biāo)本從玻片上脫落,除去妨礙抗體結(jié)合的類脂,易于保存。固定標(biāo)本的原則應(yīng)不損傷細(xì)胞的形態(tài)、細(xì)胞內(nèi)的抗原和細(xì)胞膜的通透性。

 

蛋白質(zhì)類抗原如血清蛋白質(zhì)和抗體,可用乙醇或甲醇固定;微生物抗原可用丙酮或三氯化碳固定;如需除去病毒的蛋白質(zhì)外殼,則可使用胰蛋白酶;多糖類抗原用10% 福而馬林固定或以微火加熱固定。如有粘液物質(zhì)存在,應(yīng)用透明質(zhì)酸酶等處理除去。類脂質(zhì)豐富的組織進(jìn)行蛋白、多糖抗原檢測時,需用有機溶劑(乙醚、丙酮等)處理除去類脂。

 

三:標(biāo)本的保存

 

標(biāo)本在固定干燥后,立即進(jìn)行熒光抗體染色及鏡檢。如必須保存時,則應(yīng)保持干燥,置4℃以下保存。一般細(xì)菌涂片或器官組織切片經(jīng)固定后可保存一個月以上。但病毒和某些組織抗原標(biāo)本抗原性喪失很快,數(shù)天后就失去其抗原性,需在-20℃以下保存。

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ELISA試劑盒:進(jìn)口ELISA試劑盒,國產(chǎn)ELISA試劑盒,人elisa試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒等。
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生物試劑:Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進(jìn)口試劑。
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