羧肽酶的理化性質
更新時間：2017-01-04 點擊次數(shù)：1289次羧肽酶是一種消化酶?？蓪Ｒ恍缘貜碾逆湹腃端開始逐個降解，釋放出游離氨基酸的一類肽鏈外切酶。以酶原形式存在于生物體內。常用的有A、B、C及Y ，4種羧肽酶。
羧肽酶A能水解蛋白質和多肽底物C端芳香族或中性脂肪族氨基酸殘基，釋放除脯氨酸、羥脯氨酸、精氨酸和賴氨酸之外的所有C末端氨基酸，更易于水解具有芳香族側鏈和大脂肪側鏈的羧基端氨基酸。比如酪氨酸，苯丙氨酸，丙氨酸等。 羧肽酶A（carboxypeptidase A）,CPA， 因其底物的*字“A”而得名羧肽酶A 。
羧肽酶Y以酶原的形式存在于酵母細胞中，在分離制備時，首先用有機溶劑使酵母細胞自溶破裂，然后在pH5.0進行活化，將酶原轉變成酶。經(jīng)DEAE-纖維素柱層析除去大量雜蛋白，再用DEAE-sephadexA-50柱進行純化。必要時再通過sephadexG-150柱，可得到更純的酶。經(jīng)過以上分離純化步驟后，酶可提純400倍以上。用聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定為一條帶。
自1967年發(fā)現(xiàn)此酶以來，人們對它的理化性質、分子結構以及應用等方面進行了研究。每分子羧肽酶Y約含有16個氨基葡萄糖(glucosamine)殘基和15%的己糖。其氨基酸組成中，酸性氨基酸含量較高，等電點為3.6。分子量約為61000Da，在280nm的消光系數(shù)為15.0。酶活性可被二異丙基氟磷酸(DFP)強烈抑制，因而認為它是屬于活性中心含有絲氨酸殘基的酶類。羧肽酶Y可被一些金屬離子如Cu2+，Hg2+，F(xiàn)e2+，Mg2+等所抑制。因此在酶的分離制備過程中要防止與金屬離子接觸。羧肽酶Y在蛋白質變性劑或某些溶劑存在下是相當穩(wěn)定的，它與6mol/L尿素在25℃保溫1小時仍保留大約80%的活性。在10%甲醇存在下，25℃，pH5.5～8.0，8小時內酶*穩(wěn)定。羧肽酶Y水溶液在25℃，pH5.5～8.0范圍內，它的活性在8小時內是穩(wěn)定的。在37℃，pH6～8，2小時內是穩(wěn)定的。在低于pH3，60℃以上保溫時，酶迅速失活。酶在飽合硫酸銨溶液中，在-20℃可保存。1%的酶溶液(pH7.0)在-20℃冰凍保存，二年內不失活。若稀釋到0.1mg/L則迅速失活。酶溶液的反復冰凍和融化或延長室溫貯存時間，可引起酶本身的自溶。
羧肽酶Y具有肽酶和酯酶活性，可用人工合成的苯甲氧羰二肽(CBZ-Phe-Leu)或N-乙酰酪氨酸乙酯(N-acetyl-L-tyrosine ethyl ester，簡稱ATEE)為底物，分別測定其肽酶活性或酯酶活性。一般多用紫外分光光度法測定酶活性。
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