免疫熒光實驗檢測有直接法和間接法兩種您知道嗎？
更新時間：2018-08-10 點擊次數(shù)：4677次免疫熒光實驗檢測有直接法和間接法兩種您知道嗎？信帆生物提供免疫熒光實驗技術(shù)服務(wù)，檢測效果好，時間短，數(shù)據(jù)真實有效，提供圖片，實驗報告，實驗室儀器型號，所用抗體型號等，如果您對免疫熒光實驗檢測感興趣可找信帆生物，為您的科研實驗助力！
免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescence technique）又稱熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展很早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù)。很早以來就有一些學(xué)者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。它是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光基團(tuán)，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細(xì)胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)和定位。
免疫熒光技術(shù)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素，制成熒光抗體，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢測組織或細(xì)胞內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。在組織或細(xì)胞內(nèi)形成的抗原抗體復(fù)合物上含有標(biāo)記的熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本，熒光素受外來激發(fā)光的照射而發(fā)生明亮的熒光（黃綠色或橘紅色），可以看見熒光所在的組織細(xì)胞，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位，以及利用定量技術(shù)測定含量。
免疫熒光有直接法和間接法兩種。（1）直接法：將標(biāo)記的特異性熒光抗體，直接加在抗原標(biāo)本上，經(jīng)一定的溫度和時間的染色，用水洗去未參加反應(yīng)的多余熒光抗體，室溫下干燥后封片、鏡檢。（2）間接法：如檢查未知抗原，先用已知未標(biāo)記的特異抗體（抗體）與抗原標(biāo)本進(jìn)行反應(yīng)，用水洗去未反應(yīng)的抗體，再用標(biāo)記的抗抗體（第二抗體）與抗原標(biāo)本反應(yīng)，使之形成抗原—抗體—抗體復(fù)合物，再用水洗去未反應(yīng)的標(biāo)記抗體，干燥、封片后鏡檢。如果檢查未知抗體，則表明抗原標(biāo)本是已知的，待檢血清為抗體，其它步驟的抗原檢查相同。標(biāo)記的抗抗體是抗球蛋白抗體，同于血清球蛋白有種的特異性。
免疫熒光實驗檢測有直接法和間接法兩種您知道嗎？
免疫熒光染色
固定
將細(xì)胞爬片用0.02M PBS洗去培養(yǎng)基，再用4%甲醛固定30min，0.02M PBS洗3min×3次；
一抗孵育
滴加一抗（選擇稀釋比例），濕盒孵育， 4℃孵育過夜。0.02M PBS沖洗3min×3次。
二抗孵育
滴加合適比例稀釋的熒光二抗，濕盒孵育，室溫下放置1h。0.02M PBS沖洗3min×3次。
封片和拍照
防淬滅封片劑與DAPI 1:500稀釋封片，-20℃冰箱保存，熒光顯微鏡拍片。
免疫熒光實驗檢測有直接法和間接法兩種您知道嗎？
