NHS活化瓊脂糖凝膠FF

英文名稱：NHS activated-Berpharose FF

貨號：B2828

規(guī)格：10ml

1.      產(chǎn)品介紹

NHS-瓊脂糖凝膠FF是一種將瓊脂糖凝膠微球用NHS活化形成的生物親和層析分離

介質(zhì)。該產(chǎn)品保留了瓊脂糖極-好的親水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，同生物活性大分子有很好的相容性，具有載量高、非特異性吸附少和流速快等特點。本活化的瓊脂糖凝膠能溫和地同氨基基團反應(yīng)，特別適合偶聯(lián)抗體、鏈霉親和素、酶和核酸等功能性生物大分子。

2.規(guī)格

1ml、10ml、100ml、500ml 使用方法

應(yīng)用舉例：

NHS-瓊脂糖凝膠FF偶聯(lián)抗體

①配制抗體：取100 mg IgG用10 ml偶聯(lián)緩沖液（0.2 M NaHCO3，0.5 M NaCl，pH8.3）溶解。

②偶聯(lián)反應(yīng)：取10 ml NHS-瓊脂糖凝膠FF，用50 ml的1 mM HCl分三次清洗去除保存液，之后立即加入到抗體偶聯(lián)溶液中，4℃振蕩偶聯(lián)6 h或者偶聯(lián)過夜。

③封閉：上述溶液過濾，用50 ml偶聯(lián)緩沖液清洗偶聯(lián)后的凝膠，用10 ml封閉緩沖液（0.2 M NaHCO3，0.5 M NaCl，0.5 M乙醇胺，pH8.3）于室溫振蕩4 h（或者過夜）以封閉未偶聯(lián)的基團，之后用20 ml蒸餾水清洗干凈即可。

④檢測：用SDS-PAGE檢測偶聯(lián)前后的反應(yīng)液并計算偶聯(lián)效率，偶聯(lián)好的填料根基特性測定功能和載量。

5.注意事項：

1)偶聯(lián)緩沖液可以是碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液，但絕對不能使用氨基緩沖體系（如Tris-HCl緩沖液）。

2)穩(wěn)定的配基可以直接溶于0.2 M NaHCO3，可適當(dāng)提高偶聯(lián)溫度（如室溫）將偶聯(lián)時間縮短至1~2 h。

3)如對配基的穩(wěn)定性不夠了解，可以選擇不同pH值緩沖液和不同溫度，用0.5~1 ml配基相應(yīng)濃度的溶液，在無填料的條件下模擬偶聯(lián)反應(yīng)，觀察溶液是否會產(chǎn)生沉淀。有沉淀產(chǎn)生說明偶聯(lián)效果不佳，可適當(dāng)降低緩沖液pH值或溫度。同時可以添加約5%的甘油或PEG保護蛋白，避免產(chǎn)生沉淀。

4)根據(jù)偶聯(lián)蛋白的穩(wěn)定性選擇合適的偶聯(lián)pH值和溫度。偶聯(lián)較適pH值為pH7.5~9.0，室溫或4℃均可。提高偶聯(lián)溫度能夠提高配基的偶聯(lián)效率。

5)偶聯(lián)蛋白溶液的濃度以5~15 mg/ml為佳。偶聯(lián)凝膠體積和配基溶液的體積比以1:0.5~1:2.0為佳。

6)如果偶聯(lián)的配基不穩(wěn)定，可于4℃振蕩偶聯(lián)1~12 h以維持配基的活性。偶聯(lián)配基后應(yīng)盡快清洗填料，避免配基在高pH條件下失活。

7)封閉緩沖液一般使用帶氨基的小分子試劑，如乙醇胺、Tris等。于pH8~9、室溫條件下封閉數(shù)小時可完-全封閉。推薦封閉緩沖液：0.5 M乙醇胺，0.5 M NaCl，pH8.3或0.1 M Tris-HCl，pH8.5。

8)偶聯(lián)中盡量使用溫和的混勻方式，如振蕩、翻轉(zhuǎn)和旋轉(zhuǎn)等，如使用磁力攪拌器或者機械攪拌，需要降低攪拌速度，使填料能夠混勻完-全懸浮即可，避免劇烈攪拌導(dǎo)致凝膠微球破碎。

9)NHS-瓊脂糖凝膠FF需現(xiàn)取現(xiàn)用，避免取出后放置時間過長導(dǎo)致活性降低。

10)僅供科研實驗使用

NHS活化瓊脂糖凝膠FF